Романный набор Coronavirus (2019-nCoV) нуклеиновый кисловочный диагностический
(Прощупывание PCR-флуоресцирования)
Предполагаемое использование
Набор Coronavirus романа (2019-nCoV) нуклеиновый кисловочный диагностический (прощупывание PCR-флуоресцирования) использован для качественного обнаружения генов ORF1ab и n романного coronavirus (2019-nCoV) в носоглоточной пробирке, oropharyngeal пробирке, луночной жидкости лаважа, мокроте, сыворотке, всей крови и фекалиях от заподозренных случаев пневмонии с романной инфекцией coronavirus, пациентах с заподозренными группами романной инфекции coronavirus, и других пациентах требуя диагноза или дифференциального диагноза романной инфекции coronavirus.
Для in vitro диагностической пользы только. Для профессиональной пользы только.
Сводка
Определения «заподозренных случаев» и «заподозрили что группы пациентов» будет определено путем ссылаться на «диагноз пневмонии и программу лечения для романной инфекции Coronavirus» и «контролирующую программу случая пневмонии для романной инфекции Coronavirus» выданной CDC Китая (currentversion).
Романное Coronavirus (2019-nCoV) нуклеиновый кисловочный диагностический набор (прощупывание PCR-флуоресцирования) только использован для вспомогательного диагноза родственных случаев и аварийного запаса для in vitro диагноза во время вспышки пневмонии романной инфекции Coronavirus (2019-nCoV) с December2019, этот набор быть использовано как режим in vitro диагностический в клинической практике.
Пожалуйста следовать уместными требованиями «диагноза и программы лечения пневмонии для романной инфекции Coronavirus», «предохранением пневмонии и программой управления для романной инфекции Coronavirus» и другими документами в пользе.
Романные испытания на кислотность Coronavirus нуклеиновые должны исполнить с «техническими директивами для лабораторных испытаний романного Coronavirus в CDC Китая» и сдержать хороший biosafety.
Принцип теста
Путем приложение технологии флуоресцирования в реальном времени количественной RT-PCR на аппаратуре PCR флуоресцирования количественной, этот тест использует романное coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab и специфическую сохраненную последовательность кодировать ген n протеина nucleocapsid как зоны мишеней которые конструированы для сохраненной последовательности генов двух-цели, для того чтобы достигнуть обнаружения РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ образца через дневные изменения сигнала.
Система обнаружения PCR использует положительный внутренний контроль, который контролирует присутсвие иов АБС битор PCR в образцах теста путем обнаруживать ли сигнал внутреннего контроля нормален, для избежания ложного отрицательного результата.
Компоненты диагностического набора
Этот набор реагент реакции амплификации и содержит следующие компоненты:
| Нет. |
Имя реагента |
Спецификации. & Qty |
Главные ингредиенты |
| 24 t |
48 t |
| 1 |
смешивание 2019-nCov-PCR |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Премьер-министры (4,62%), зонды (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%),
Буфер PCR (89,13%)
|
| 2 |
смешивание 2019-nCov-PCR-Enzyme |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Энзим RT (62,5%),
Энзим Taq (37,5%)
|
| 3 |
контроль 2019-nCov-PCR-Positive |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
In vitro Transcriptional РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА содержа гены цели (ген ORF1 ab, n) и внутренние стандартные части гена (рНКазу p) |
| 4 |
контроль 2019-nCov-PCR-Negative |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Нормальное соляное |
Требования к образца
1. Применимый тип образца: носоглоточная пробирка, oropharyngeal пробирка, луночная жидкость лаважа, мокрота, сыворотка, вся кровь и фекалии.
2. Собрание образца
Носоглоточная пробирка/oropharyngeal пробирка: Соберите образец в соответствии с уместными обеспечениями " метода сбора образца» в «проводнике лаборатории пневмонии техническом для романной инфекции Coronavirus» от «предохранения пневмонии и плана контроля для романной инфекции Coronavirus». Доказано что пробирка сделала из головы забора нейлона и штанга забора ABS можно выбрать для собрания образца.
Носоглоточная пробирка: Трубка собрания образца должна быть наклеена со штрихкодом во-первых, носоглоточная пробирка должна быть собранным within3 через дни после натиска заболевания насколько возможно. Используйте пробирку для того чтобы измерить длину между nasi вершины и мочкой уха, тогда меткой с пальцем. Введите пробирку в носовую полость в направлении перпендикуляра к носу (стороне). Пробирка должна быть введена по крайней мере наполовину длины от мочки уха к nasi вершины. Сделайте стопы пробирки в носовом for15 | 30 s, нежно rotate3 | 5 раз, быстро положите пробирку в буфер лизиса трубки cotaining2 ml собрания образца (такое же как буфер лизиса в реагенте отпуска образца) или попробуйте реагент хранения содержа и АБС битор энзима РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ. Введите пробирку, после этого сломайте стерильную штангу пробирки около верхней части, затянуть крышку трубки и уплотнение с фильмом запечатывания.
Oropharyngeal пробирка: Трубка собрания образца должна быть наклеена со штрихкодом во-первых, oropharyngeal пробирка должна быть собрана в течение 3 дней после натиска заболевания насколько возможно. Стерильная собираясь пробирка должна быть использована для забора, в меру обтирает заднюю pharyngeal стену, избегает касаться языку. Быстро место стерильная пробирка в трубку собрания используемую для собрания oropharyngeal пробирки. Сломайте стерильную штангу пробирки около верхней части, затяните крышку трубки и уплотнение с фильмом запечатывания.
Луночная жидкость лаважа: Строгие пациенты или пациенты с пневмонией которое прогресс быстро. Врач-клиницист extract≥5ml BALF в безгнилостный контейнер 50ml обозначенный со штрихкодом и завинчивой пробкой образца безгнилостной деятельностью. Соберите образец, тогда затяните крышку трубки и уплотнение с фильмом запечатывания.
Мокрота:
Трубка собрания образца должна быть наклеена со штрихкодом сперва. Не раскройте авиалинию для того чтобы собрать образцы собирая мокроту. Мокрота кашля Collect.deep в устранимую безгнилостную пробуя чашку с завинчивой пробкой, нагрузкой протеаза k 2 mL (1g/L) в пробовать чашку. Соберите мокроту, тогда затяните крышку трубки и уплотнение с фильмом запечатывания. Отправьте в обнаружение не позднее минута 30 насколько возможно. Протеаза k не должна быть добавлена сперва если образцам нужно быть транспортированным над длинными расстояниями.
Вся кровь:
Пробы крови можно собрать в течение 7 дней после натиска или критических пациентов, или пациентов рассматриваемых с вирусемией. Трубка собрания образца должна быть наклеена со штрихкодом сперва. Соберите 2~4ml проб крови в трубку собрания крови вакуума содержа противокоагулятор ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТА.
Фекалии:
Для пациентов с желудочно-кишечными симптомами как понос на ранней стадии заболевания, фекалии заповедника 3~5g (размера сои). Трубка собрания образца должна быть наклеена со штрихкодом сперва. Соберите образец в трубку собрания образца с завинчивой пробкой содержа нормальное соляное (и АБС битор энзима РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ можно добавить когда условия позволяют) после этого уплотнение 2ml с фильмом запечатывания.
После собрания образца, порекомендованы, что устанавливает в реагент хранения образца для консервации.
Было доказано что решение консервации, как нормальное соляное, буфер TE, гуанидин 2-4M содержа (как хлоргидрат гуанидина) можно также использовать как реагент хранения образца для консервации образца. Реагент хранения образца содержа гуанидин нельзя сразу приспособиться для того чтобы попробовать реагент отпуска изготовленный Sansure Biotech Inc. для нуклеинового кисловочного извлечения. При необходимости, порекомендованы, что использует извлечение нуклеиновой кислоты (DNA/RNA) или набор очищения (магнитный метод) шариков (справочный номер: S1002E) изготовленное Sansure Biotech Inc. или набором вирусной РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ QIAamp мини (50) изготовленным QIAGEN для нуклеинового кисловочного извлечения.
3. Хранение и доставка образцов:
Образцы, который нужно испытать можно немедленно обрабатывать, образцы, который нужно испытать в течение 24 часов можно хранить на 4℃. Образцы которые нельзя обнаружить в течение 24 часов следует сохранить на -70℃ или ниже (в отсутствии условий хранения -70℃, образцы, который нужно испытать можно хранить на -20℃ на 10 дней, нуклеиновая кислота можно хранить на -20±5℃ на 15 дней). Множественные циклы замораживания/таяния следует избежать. Образцы должны быть транспортированы в загерметизированный замороженный кувшин с льдом или в загерметизированную коробку пены с льдом. Инактивирование образцов на 56℃ для 30min не повлияет на обнаружение этого набора.
Анализ результата (см. руководство потребителя аппаратуры для того чтобы отрегулировать установки.)
Результаты будут сохранены автоматически когда реакции будут завершены. Проанализируйте кривую усиления цели обнаружения и внутреннего контроля. Отрегулируйте начало, конец и пороговые значения базиса диаграммы согласно результату анализа (потребители могут отрегулировать значения согласно обстановке на данный момент. Значение начала может быть установило между 3-15, и конечным значением между 5-20. Отрегулируйте кривую усиления отрицательного контроля для того чтобы быть квартирой или под порогом). Нажмите «для того чтобы проанализировать» для того чтобы снабдить анализ, убеждайтесь каждый параметр для того чтобы удовлетворять требования уступанные «проверка качества». Пойдите к окну «плиты» записать качественные результаты.
Проверка качества
| Деталь |
контроль 2019-nCoV-PCR-Negative |
контроль 2019-nCoV-PCR-Positive |
| Значение Ct |
Отсутствие Ct или Ct > 40 на канале FAM, ROX и НАГОВОРЕ
(Внутренний контроль)
|
≤ 35 на канале FAM, ROX и НАГОВОРЕ
(Внутренний контроль)
|
Результат теста обработан как действительное если все условия в вышеупомянутом соотвествованы для такого же теста. В противном случае результату теста обработан как инвалидный и нужно быть испытанным повторно.
Объяснение результата обнаружения
| Заключение |
Результаты амплификации |
| позитв 2019-nCoV |
Типичная кривая усиления S-формы обнаруженная на канале FAM и/или ROX, и кривая усиления которая обнаружена на канале НАГОВОРА, Ct≤40. |
| недостаток 2019-nCoV |
Никакая типичная кривая усиления S-формы (отсутствие Ct) или Ct > 40 обнаруженное на канале FAM и ROX, и кривая усиления которая обнаружена на канале НАГОВОРА, ≤ 40 Ct. |
Никакая типичная кривая усиления S-формы обнаруженная на канале FAM, ROX и НАГОВОРА (отсутствие Ct), или Ct > 40. Показано что концентрация образца слишком низка, или мешая вещества которые блокируют реакцию. Результат теста инвалидн. Исследование должно быть выполнено для того чтобы узнать и исключить причины, пожалуйста собирает образец снова и испытывает повторно образцы.
Примечание: Для культур вируса, никакие требования для результатов теста внутреннего контроля.
Хранение и стабильность
1. Диагностический набор должен храниться в опечатанной вализе at-20±5°C и защищаться от света. Набор provisionally действителен на 6 месяцев.
2. Пожалуйста см. дата изготовления и срок годности на наружном пакете.
3. Реагенты держат действительный и стабилизированный внутри срок годности если не использованный. Покуда контейнер реагента раскрыт, замораживание/циклы таяния не должны превысить 3.
Совместимая аппаратура
Диагностический набор применим к SLAN-96P, ABI7500, технологиям QuantStudio TM5 жизни, RocheCobas480, аппаратураPCRMA-6000.
Ваше сообщение должно содержать от 20 до 3000 символов!
